c语言测序-C语言测序设计第五版谭浩强免费PDD

大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于c语言测序的问题，于是小编就整理了3个相关介绍c语言测序的解答，让我们一起看看吧。

1. Sanger法测序路线？
2. 为什么测序公司不能测序，说是信号中断，什么原因？
3. 为什么质粒和PCR产物需要拿去测序啊？

Sanger法测序路线？

Sanger法是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，并且在每个碱基后面进行荧光标记，产生以A、T、C、G结束的四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的P***E胶上电泳进行检测，从而获得可见的DNA碱基序列。

Sanger法测序的原理就是，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)使之扩增，并混入***的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)使之终止。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3‘-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止，终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几个至千以上个，相差一个碱基一系列片断。它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。

为什么测序公司不能测序，说是信号中断，什么原因？

原因在于测序时经历了PCR反应及测序反应（测序反应本身也是PCR反应）二次聚合酶的打滑现象.原因不明的复杂结构,测序结果就出现突然信号减弱或消失.出现这些现象的原因由DNA模板本身立体结构所造成的. 当DNA碱基中含GC含量高的时候,从某一位置开始聚合酶的聚合反应便无法进行下去.这样的情况,建议可以尝试换用反向引物进行测序.或者是将PCR产物做一个TA克隆后再测序,可以根本上解决测序信号中断的问题.

原因在于测序时经历了PCR反应及测序反应（测序反应本身也是PCR反应）二次聚合酶的打滑现象.原因不明的复杂结构,测序结果就出现突然信号减弱或消失.出现这些现象的原因由DNA模板本身立体结构所造成的.

当DNA碱基中含GC含量高的时候,从某一位置开始聚合酶的聚合反应便无法进行下去.这样的情况,建议可以尝试换用反向引物进行测序.或者是将PCR产物做一个TA克隆后再测序,可以根本上解决测序信号中断的问题.

为什么质粒和PCR产物需要拿去测序啊？

质粒和PCR产物需要拿去测序有2个目的，一是验证插入序列的DNA序列是否无误。第二是看插入的方向和位置是否正确。如果做定量PCR用到质粒的话，一般是用来做标准曲线的。

聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA***，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR技术的真正诞生。到如今2013年，PCR已发展到第三代技术。1***3 年，台籍科学家钱嘉韵，发现了稳定的Taq DNA聚合酶，为PCR技术发展也做出了基础性贡献。

PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。

到此，以上就是小编对于c语言测序的问题就介绍到这了，希望介绍关于c语言测序的3点解答对大家有用。